Yaowalark SukthanaSupaluk PoprukKamlang ChumpolbanchornWoraporn SukhumavasiChantira Suttikornchai2023-09-112023-09-11201620162023Thesis (Ph.D. (Tropical Medicine))--Mahidol University, 2016https://repository.li.mahidol.ac.th/handle/123456789/89774Cryptosporidium, a highly adaptable protozoan parasite, can be transferred from land to estuary, river, and coastal waters in runoff. Often eaten raw, oysters feed on particles, including Cryptosporidium oocysts, and accumulate the oocysts inside their body via filtration. In this study, the ability of oysters to trap C. parvum oocysts and the feasibility of multiplication in oysters were determined by raising oysters in natural seawater experimentally seeded with C. parvum oocysts, for up to 3 months. Two vital immunofluorescence staining techniques (Sporo-GloTM and Merifluor) and confocal microscopy were used to detect and study the viability of the C. parvum oocysts. Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) amplification was also used to detect and quantify the number of oocysts. The natural contamination rate of Cryptosporidium spp. in large oysters was assessed. C. parvum was most concentrated, and highly viable, in the digestive organs of oysters at 24 hours post-exposure. The number of oocysts then dropped significantly within 7 days and remained low until being no longer detectable at 84 days. Despite some oocysts releasing sporozoites, there was no evidence of sporozoite transformation to other life-cycle stages or multiplication. Compared with RT-PCR amplification, immunofluorescence techniques were found to be more effective in detecting C. parvum in oysters in this study. The natural contamination rate for Cryptosporidium spp. in oysters was only 2 % (1/50). Although the oyster is a mechanical disease-transmission host, it is not a good sentinel for monitoring Cryptosporidium contamination in natural habitats. Due to the low infective dose of Cryptosporidium, eating raw oysters still poses a public- health concern. Well-cooked dishes are recommended. Otherwise, raw oysters should undergo depuration in clean seawater (to purge impurities) for at least 24 hours before sale and/or consumption.เชื้อ Cryptosporidium เป็นโปรโตซัวที่มีความสามารถในการปรับตัวสูง และเจริญเติบโตในสิ่งมีชีวิตชนิดต่างๆ หอยนางรมเป็นสัตว์ที่อาศัยอยู่บริเวณชายฝั่งทะเล ดำรงชีวิตโดยการกรองกินสิ่งมีชีวิตที่เป็นอนุภาคขนาดเล็กรวมถึง Cryptosporidium oocysts ที่ปนเปื้อนมาจากน้ำที่ไหลลงสู่ทะเล ซึ่ง oocysts จะถูกกักเก็บ ไว้ในตัวหอย การวิจัยนี้มีจุดประสงค์เพื่อตรวจวัดว่าหอยนางรมสามารถกรองกินและเก็บ oocysts ของเชื้อ C. parvum และตรวจสอบต่อไปว่า C. parvum สามารถเพิ่มจำนวนหรือเจริญเติบโตภายในตัวหอยนางรมได้หรือไม่ โดยหอยนางรมถูกเลี้ยงไว้ในสภาพเลียนแบบน้ำทะเลธรรมชาตินานเป็นเวลา 3 เดือน โดยมีการเติมด้วยเชื้อ C. parvum ทุกสัปดาห์ การตรวจหาการปนเปื้อน และการมีชีวิตของเชื้อ C. parvum ในหอยนางรม ใช้วีธีย้อมด้วยเทคนิค vital dye immuno-fluorescence (Sporo-GloTM and Merifluor®) แล้วนำไปตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ Confocal และตรวจหาการปนเปื้อนของเชื้อและ จำนวนเชื้อโดยวิธีทางอณูชีววิทยา (Real-time PCR) นอกจากนี้ได้ศึกษาอัตราการปนเปื้อนของเชื้อ Cryptosporidium ใน หอยนางรมขนาดใหญ่ที่เก็บจากธรรมชาติด้วยการทดลองนี้พบว่า ณ 24 ชม หลังจากที่หอยนารมได้รับเชื้อ จำนวนเชื้อ C. parvum ที่มีชีวิตมีปริมาณมากที่สุดในส่วนย่อยอาหาร หลังจากนั้นจำนวนเชื้อลดลงอย่างรวดเร็วภายใน 7 วัน แต่ยังตรวจพบเชื้อจำนวนน้อยจนถึง วันที่ 84 ของการทดลอง จากการทดลองนี้พบว่าการตรวจด้วยเทคนิค vital dye immuno-fluorescence มีประสิทธิภาพในการตรวจพบเชื้อปนเปื้อนในหอยได้ดีกว่า Real-time PCR การตรวจพบระยะ sporozoites ที่แตกออกจาก oocysts ของ C. parvum พบได้หลายครั้ง แต่ไม่มีการพบเชื้อในระยะอื่นๆของเชื้อเลย ดังนั้นหอยนางรมจึงเป็นเพียงโฮสต์ ตัวกลางที่ส่งผ่านเชื้อ Cryptosporidium ไปยังโฮสต์อื่นๆเท่านั้น เนื่องด้วยอัตราการปนเปื้อนเชื้อของหอยนางรมธรรมชาติต่ำ (ร้อยละ ๒) หอยนางรมจึงเป็นตัวเฝ้ าระวังการปนเปื้อนของเชื้อ Cryptosporidium ตามธรรมชาติได้ไม่ดีอย่างไรก็ตามเชื้อในปริมาณน้อยก็สามารถก่อโรคได้ ดังนั้นการบริโภคหอยดิบที่มีการปนเปื้อนจึงยังเป็นปัญหาทางสาธารณสุขที่ควรได้รับความสนใจ สำหรับความปลอดภัยในการบริโภค ควรสนับสนุนให้บริโภคหอยนางรมที่ปรุงสุกหรือหอยนางรมที่เก็บจากธรรมชาติควรถูกเลี้ยงไว้ในน้ำทะเลสะอาดเป็นเวลาอย่างน้อย ๒๔ ชม. ก่อนนำไปบริโภคหรือจำหน่ายxiii, 137 leaves : col. ill.application/pdfengCryptosporidiumOyster cultureMahidol University