การแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีนเปลือกนอกของเชื้อไวรัสโรคขนและจงอยปากผิดปกติโดยใช้ระบบเชื้อยิสต์ Pichiapastoris

Abstract

เชื้อไวรัสโรคขนและจงอยปากผิดปกติเป็น haemagglutination circo virus และเป็นสาเหตุของโรคขนและจงอยปากผิดปกติที่พบในกลุ่มนกตระกูลนกปากขอ นกที่เป็นโรคจะมีอาการขนร่วงและอาจมีจงอยปากยื่นยาวไม่สวยงาม เนื่องจากเชื้อนี้ไม่สามารถเพาะเลี้ยงในเนื้อเยื่อหรือเซลล์เพาะเลี้ยงและไข่ไก่ฟักได้ เป็นผลให้การพัฒนาวิธีการตรวจและการพัฒนาวัคซีนต่อโรคทำได้ค่อนข้างยาก ดังนั้น ในการศึกษาครั้งนี้จะทำการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนเปลือกนอกของเชื้อไวรัสโรคขนและจงอยปากผิดปกติ โดยให้ยีนมีการแสดงออกโดยอาศัยระบบเชื้อยีสต์ Pichia pastoris จากนั้นทำให้รีคอมบิแนนท์โปรตีนบริสุทธิ์ โดยอาศัยหลักการ Affinity binding กับโมเลกุลของโลหะนิเกิล จากผลการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์โปรตีนเปลือกนอกพบว่า มีการแสดงออกได้ดีที่สุดหลังจากกระตุ้นด้วยเมทานอล 48 ชั่วโมง และพบว่าส่วนใหญ่เป็น inclusion bodies เมื่อนำโปรตีนมาทำการแยกขนาดด้วยกระแสไฟฟ้า พบว่าโปรตีนมีขนาดประมาณ 38 kDa นอกจากนี้ยังพบว่ารีคอมบิแนนท์โปรตีนสามารถจับกับซีรัมของนกที่ติดเชื้อไวรัสโรคขนและจงอยปากผิดปกติได้ เมื่อตรวจด้วยวิธี Western blot analysis ซึ่งข้อมูลที่ได้นี้จะช่วยให้มีการพัฒนาวิธีการตรวจหาเชื้อและผลิตวัคซีนต่อเชื้อไวรัสโรคขนและจงอยปากผิดปกติ โดยใช้รีคอมบิแนนท์โปรตีนเปลือกนอกในอนาคต

Psittacine beak and feather disease virus (BFDV) is a haemagglutination circo virus causing psittacine beak and feather disease (PBFD) in psittacine birds. The infected birds showed feather dystrophy and occasionally associated with beak deformities. Development of vaccine and detection of the disease is difficult and ineffective due to this virus could not be cultured in tissue or cell lines and embryonated eggs. The aim of this study was to express recombinant capsid protein of BFDV using Pichia pastoris system. The recombinant protein was purified by affinity binding with Ni-NTA resin. From the results, the time point of protein expression was 48 hours after inducing with methanol. The recombinant capsid protein was expressed in inclusion bodies form. From SDS-PAGE analysis, the protein had molecular weight of 38 kDa. Moreover, Western blot analysis demonstrated that this recombinant protein could react with convalescent serum from BFDV-infected bird. Based on this information, it would be a potential to develop in house BFDV capsid protein-based diagnostic test and vaccine in the future.