การศึกษาปริมาณดีเอ็นเอที่ได้จากการสกัดจากเส้นผมของผู้เสียชีวิต

Abstract

บทนำ: ปัญหาที่พบบ่อยในการสกัดดีเอ็นเอจากเส้นผมคือการได้ปริมาณน้อยและมีความไม่บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ วัตถุประสงค์: เพื่อประเมินการสกัดดีเอ็นเอจากรากผมโดยวิธีสกัดด้วยสารละลาย Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol วิธีการศึกษา: ตัวอย่างรากผม จำนวน 5 เส้น และ 10 เส้น ของผู้เสียชีวิต จำนวน 30 คน ถูกนำมาสกัดดีเอ็นเอด้วยสารละลาย Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol จากนั้นเปรียบเทียบปริมาณและความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอโดยใช้เครื่อง NanoDrop spectrophotometer และตรวจสอบคุณภาพของดีเอ็นเอโดยวิธี PCR ทำการวิเคราะห์ปริมาณของดีเอ็นเอที่สกัดได้กับปัจจัยที่อาจมีผลกระทบ เช่น เพศ อายุ และพฤติการณ์การเสียชีวิต ผลการศึกษา: ปริมาณและความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอจากรากผม 10 เส้น สูงกว่ารากผม 5 เส้น (P > .05) โดยปริมาณดีเอ็นเอจากรากผม 10 เส้น และ 5 เส้น ในปริมาตร 30 ไมโครลิตร มีค่าเฉลี่ย (ค่าต่ำสุด - ค่าสูงสุด) เท่ากับ 200.4 (35.2 - 799.6) และ 148.2 (21.7 - 571.5) นาโนกรัมต่อไมโครลิตร ตามลำดับ ความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ (A260/280) ของรากผม 10 เส้น และ 5 เส้น มีค่าเฉลี่ย (ค่าต่ำสุด - ค่าสูงสุด) เท่ากับ 1.6 (1.3 - 1.9) และ 1.5 (1.3 - 1.9) ตามลำดับ ปัจจัยด้านเพศ อายุ และพฤติการณ์การเสียชีวิตไม่มีผลต่อปริมาณและความบริสุทธิ์ดีเอ็นเอจากรากผม สรุป: ดีเอ็นเอสามารถถูกสกัดจากรากผมโดยวิธีสกัดด้วยสารละลาย Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol โดยได้ปริมาณและคุณภาพของดีเอ็นเอเพียงพอสำหรับตรวจพิสูจน์เอกลักษณ์บุคคล และการสกัดดีเอ็นเอจากรากผม 10 เส้น ได้ผลดีกว่ารากผม 5 เส้น

Background: Problems frequently occur from hair extraction are low concentration and impurity of DNA. Objective: To assess the Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol method for extracting DNA from hair roots. Methods: Hairs from 30 postmortem cases were collected. In each case, 5 and 10 hair roots were extracted DNA by Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol. The amount and purity of DNA (A260/280) were detected by NanoDrop spectrophotometer. The quality of DNA was examined using polymerase chain reaction (PCR). Amount of DNA was analyzed compared with gender, age, and manner of death. Results: The amount and purity of DNA extracted from 10 hair roots were slightly better than 5 hair roots (P > .05). The mean (range) of DNA concentration was 200.4 (35.2 - 799.6) ng/µL from 10 hair roots vs 148.2 (21.7 - 571.5) ng/µL from 5 hair roots in 30 µL volume whereas the mean (range) of A260/280 was 1.61 (1.31 - 1.99) in 10 hair roots vs 1.54 (1.32 - 1.90) in 5 hair roots. The results from NanoDrop showed no difference among various gender, age, and manners of death. Conclusions: DNA can be extracted from hair by Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol. The quantity and quality of DNA were good enough for personal identification by PCR. DNA extracted from 10 hair roots is better than 5 hair roots.