Evaluation of 3 Common Methods for Effective Housefly Allergen Extraction Article Sidebar

Abstract

Background: Allergen extracts have been applied to treat allergic diseases. Accordingly, a housefly (Musca domestica) extract is commonly used to treat patients severely allergic to housefly. Objective: To evaluate 3 common methods, including grinding, sonication, and homogenization, for effective preparation of housefly allergen extracts. Methods: Housefly allergens were extracted from Musca domestica using 3 different methods, including grinding, sonication, and homogenization. Protein concentrations and profiles in the extracts were determined by Bradford assay and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), respectively. Results: The protein concentrations of the extracts prepared by grinding (mean [SD], 911.3 [159.7] µg/µL) and sonication (mean [SD], 905.7 [188.6] µg/µL) as measured by Bradford assay were significantly higher than those prepared by homogenization (mean [SD], 674.5 [60.0] µg/µL). Moreover, SDS-PAGE showed more protein bands in the extracts prepared using grinding and sonication compared to those prepared using homogenization. Conclusions: In comparison to homogenization, both grinding and sonication methods are superior ways to prepare housefly allergen extracts as evidenced by the higher quantities and composition of proteins.

บทนำ: น้ำยาสกัดจากสารก่อภูมิแพ้ผลิตขึ้นมาเพื่อใช้ในการทดสอบหรือรักษาโรคภูมิแพ้ น้ำยาสกัดจากแมลงวันบ้าน (Musca domestica) เป็นหนึ่งในสารสกัดสารก่อภูมิแพ้ที่ใช้สำหรับการรักษาผู้ป่วยที่แพ้ต่อแมลงวันบ้าน วัตถุประสงค์: เพื่อเปรียบเทียบวิธีการสกัดน้ำยาสารก่อภูมิแพ้จากแมลงวันบ้านด้วยวิธีการสกัด 3 รูปแบบ คือ วิธี Grinding วิธี Sonication และ วิธี Homogenization วิธีการศึกษา: การสกัดสารก่อภูมิแพ้จากแมลงวันบ้านสายพันธุ์ Musca domestica โดยใช้วิธีการสกัด 3 แบบ คือ วิธี Grinding วิธี Sonication และ วิธี Homogenization จากนั้นวัดปริมาณโปรตีนในน้ำยาสกัดแมลงวันบ้านด้วยวิธี Bradford assay และวิเคราะห์องค์ประกอบของโปรตีนในน้ำยาสกัดแมลงวันบ้านด้วยวิธี Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ผลการศึกษา: การวัดปริมาณโปรตีนจากสารสกัดแมลงวันบ้านด้วยวิธี Bradford assay พบว่า ค่าเฉลี่ยปริมาณโปรตีนของการสกัดด้วยวิธี Grinding (mean [SD], 911.3 [159.7] µg/µL) และวิธี Sonication (mean [SD], 905.7 [188.6] µg/µL) ให้ปริมาณโปรตีนที่มากกว่าการสกัดด้วยวิธี Homogenization (mean [SD], 674.5 [60.0] µg/µL) และเมื่อศึกษาองค์ประกอบของโปรตีนในน้ำยาสกัดแมลงวันบ้านจาก SDS-PAGE พบว่า การสกัดด้วยวิธี Grinding และวิธี Sonication ให้องค์ประกอบของโปรตีนที่มากกว่าการสกัดด้วยวิธี Homogenization สรุป: การสกัดน้ำยาสารก่อภูมิแพ้แมลงวันบ้านด้วยการสกัดวิธี Grinding และวิธี Sonication ให้ปริมาณโปรตีนและองค์ประกอบของโปรตีนที่มากกว่าการสกัดวิธี Homogenization