Cloning and expression of biological active human Erythropoietin in mammalian cells
1
Issued Date
2005
Copyright Date
2005
Resource Type
Language
eng
File Type
application/pdf
No. of Pages/File Size
xvi, 82 leaves : ill.
ISBN
9740461204
Access Rights
open access
Rights
ผลงานนี้เป็นลิขสิทธิ์ของมหาวิทยาลัยมหิดล ขอสงวนไว้สำหรับเพื่อการศึกษาเท่านั้น ต้องอ้างอิงแหล่งที่มา ห้ามดัดแปลงเนื้อหา และห้ามนำไปใช้เพื่อการค้า
Rights Holder(s)
Mahidol University
Bibliographic Citation
Thesis (M.Sc. (Molecular Genetics and Genetic Engineering))--Mahidol University, 2005
Suggested Citation
Niwed Kullawong Cloning and expression of biological active human Erythropoietin in mammalian cells. Thesis (M.Sc. (Molecular Genetics and Genetic Engineering))--Mahidol University, 2005. Retrieved from: https://repository.li.mahidol.ac.th/handle/123456789/106062
Title
Cloning and expression of biological active human Erythropoietin in mammalian cells
Alternative Title(s)
การสร้างและคัดเลือกเซลล์ที่แสดงออก Erythropoietin ของมนุษย์ในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
Author(s)
Advisor(s)
Abstract
Erythropoietin (EPO) is a hematopoietic growth factor which stimulates erythropoiesis (red blood cell production). One widely used therapeutic hormone is a well-known recombinant human erythropoietin (rHuEPO) produced from genetically engineered Chinese Hamster Ovary cells. This 34-kDa glycoprotein is produced primarily by the kidney. During the post-translational modification, glycosylation occurs with the addition of 3 N-linked (at Asn-24, -38 and -83) and one O-linked (at Ser-126) acidic oligosaccharides. rHuEPO has been used for the treatment of anemia-associated diseases including rheumatoid arthritis, AIDS, and cancer. This recombinant product is prescribed on the assumption that it will increase patients' Hb level, reduce the need for transfusion and tumor progression, and thus improve quality of life and survival. This work has established a CHO based expression system to produce active rHuEPO applicable for large scale pharmaceutical production. After cloning, selection and 4-rounds of DHFR/MTX-mediated gene amplification, the stable CHO cell lines' efficiency in secreting rHuEPO were established. The expressed rHuEPO migrated in SDS-PAGE as a broad band of 40-45 kDa which was comparable with rHuEPO reference (HEMAX®). This protein was shown to have all three N-linked glycosylation sites and its carbohydrate structure termini were capped with the functional sialic acid residuals. By analysis of in vitro interaction to its receptor (EPO-R), rHuEPO was proven to be biologically active by colorimetric MTT assay after stimulation of factor-dependent TF-1 cell proliferation in dose-dependent manner. Moreover, normocytic BALB/c mice injection was employed to confirm its bioactivity in vivo. Without any purification, the rHuEPO expressed in this study showed its principal function in physiological conditions by significantly increasing % reticulocyte in testing animal. Thus, these cell lines can be applied for large-scaled production in the biopharmaceutical industry in Thailand in the future.
Erythropoietin (EPO) เป็นฮอร์โมนที่ผลิตมาจากไต ทำงานเกี่ยวข้องกับการเร่งการ สร้างเม็ดเลือดแดงในร่างกาย recombinant human erythropoietin (rHuEPO) ที่ใช้กัน ทั่วไปซึ่งสร้างมาจาก Chinese hamster ovary (CHO) cells ด้วยเทคนิคการตัดต่อทาง พันธุกรรม เป็นฮอร์โมนบำบัดโรค EPO เป็นโปรตีนที่มีขนาด 34 kDa ซึ่งมีคาร์โบไฮเดรต เป็นส่วนประกอบสำคัญโดยในโมเลกุลประกอบด้วยโครงสร้างน้ำตาลชนิด N-linked อยู่สามตำแหน่งที่กร"
Erythropoietin (EPO) เป็นฮอร์โมนที่ผลิตมาจากไต ทำงานเกี่ยวข้องกับการเร่งการ สร้างเม็ดเลือดแดงในร่างกาย recombinant human erythropoietin (rHuEPO) ที่ใช้กัน ทั่วไปซึ่งสร้างมาจาก Chinese hamster ovary (CHO) cells ด้วยเทคนิคการตัดต่อทาง พันธุกรรม เป็นฮอร์โมนบำบัดโรค EPO เป็นโปรตีนที่มีขนาด 34 kDa ซึ่งมีคาร์โบไฮเดรต เป็นส่วนประกอบสำคัญโดยในโมเลกุลประกอบด้วยโครงสร้างน้ำตาลชนิด N-linked อยู่สามตำแหน่งที่กร"
Description
Molecular Genetics and Genetic Engineering (Mahidol University 2005)
Degree Name
Master of Science
Degree Level
Master's degree
Degree Department
Institute of Molecular Biology and Genetics
Degree Discipline
Molecular Genetics and Genetic Engineering
Degree Grantor(s)
Mahidol University