Development of molecular-based assay for age determination of blowfly larvae, Chrysomya Megacephala (Diptera: Calliphoridae)
4
Issued Date
2024
Copyright Date
2019
Language
eng
File Type
application/pdf
No. of Pages/File Size
xvi, 106 leaves : ill.
Access Rights
open access
Rights
ผลงานนี้เป็นลิขสิทธิ์ของมหาวิทยาลัยมหิดล ขอสงวนไว้สำหรับเพื่อการศึกษาเท่านั้น ต้องอ้างอิงแหล่งที่มา ห้ามดัดแปลงเนื้อหา และห้ามนำไปใช้เพื่อการค้า
Rights Holder(s)
Mahidol University
Bibliographic Citation
Thesis (M.Sc. (Forensic Science))--Mahidol University, 2014
Suggested Citation
Rattiyakorn Thonglor Development of molecular-based assay for age determination of blowfly larvae, Chrysomya Megacephala (Diptera: Calliphoridae). Thesis (M.Sc. (Forensic Science))--Mahidol University, 2014. Retrieved from: https://repository.li.mahidol.ac.th/handle/123456789/91703
Title
Development of molecular-based assay for age determination of blowfly larvae, Chrysomya Megacephala (Diptera: Calliphoridae)
Alternative Title(s)
การพัฒนาวิธีตรวจระดับโมเลกุล เพื่อหาอายุของหนอนแมลงวันหัวเขียว Chrysomya Megacephala (Diptera : Calliphoridae)
Author(s)
Abstract
Post mortem interval (PMI) is the most important procedure of forensic investigation. Normally PMI is estimated by determining the anatomical and biological changes of corpse. Forensic entomology is applied to investigate PMI from the growth of blow flies that were found on corpses and on the scene. Chrysomya megacephala is the most common blow fly that are found elsewhere in Thailand; therefore, it could be used for PMI investigation, a practice in forensic investigation is the estimation of post mortem interval (PMI). Age determination of C. megacephala could be done by morphological characteristics such as length and weight of blow fly as well as its shape, anterior spiracles, and posterior spiracles and number of spiracle at the rear part of the body. Such study needs an entomologist and expertise to identify the blow fly age. However, these parameters can only identify the 1st and 2nd stage of blow fly larvae but not able to identify the 3rd stage larvae due to prolonged duration of larvae before entering into pupae. This study aimed to determine the 3rd stage larvae by developing the molecular-based method for PMI estimation of C. megacephala blow fly larvae to study chitin synthase (cs) gene. Amounts of PCR product amplified from cs gene designed primers were determined by denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC). Results showed that cs gene expression in accordance to development of blow fly larvae (day1,2,3) can distinguish the 3rd stage larvae aged day1 from day2 and day3 significantly. However, the 3rd instar larvae at day2 and day3 were not significantly different even though low expression of cs gene was observed. In conclusion, this study revealed that the determination of cs gene expression by DHPLC technique could be used for age estimation of blow fly larvae and can be applied for PMI estimation in forensic investigation.
การประมาณระยะเวลาภายหลังการตายเป็นขั้นตอนที่สำคัญของกระบวนการสืบสวนทางนิติวิทยาศาสตร์ โดยปกติจะประมาณระยะเวลาได้จากการเปลี่ยนแปลงลักษณะทางกายวิภาคศาสตร์และชีววิทยาของศพ นิติกีฏวิทยาสามารถนำมาประยุกต์ใช้เพื่อหาระยะเวลาการตายได้จากการเจริญเติบโตของหนอนแมลงวันที่พบในศพและสถานที่เกิดเหตุ แมลงวันหัวเขียว Chrysomya megacephala เป็นแมลงวันที่พบได้มากที่สุดในประเทศไทย ดังนั้นจึงใช้ในการการประมาณระยะเวลาภายหลังการตายในการสืบสวนทางนิติวิทยาศาสตร์ วิธีการหาอายุของหนอนแมลงวันสามารถทำได้โดยศึกษาทางสัณฐานวิทยา เช่น การวัดขนาดความยาวและน้ำหนักของหนอนแมลงวัน และรูปร่างของรูหายใจส่วนหน้าและส่วนท้าย ตลอดจนจำนวนรูหายใจส่วนท้ายของหนอนแมลงวัน การศึกษาดังกล่าวจำเป็นต้องอาศัยนักกีฎวิทยาที่มีความเชี่ยวชาญในการหาอายุของหนอนแมลงวันอย่างไรก็ตามวิธีนี้สามารถบ่งชี้หนอนแมลงวันในระยะที่ 1 และ 2 ได้ แต่ไม่สามารถบ่งชี้หนอนแมลงวันในระยะที่ 3 ได้ เนื่องจากระยะเวลาของหนอนค่อนข้างยาวก่อนที่จะพัฒนาเป็นดักแด้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์ในการศึกษาหนอนแมลงวันระยะที่ 3 โดยอาศัยหลักการทางอณูชีววิทยาในการประมาณระยะเวลาภายหลังการตายโดยศึกษาปริมาณการแสดงออกของยีนไคติน ซินเทสโดยเพิ่มผลิตผลของ PCR และวิเคราะห์ด้วยเทคนิค denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC) พบว่าการแสดงออกของยีนไคติน ซินเทส สัมพันธ์กับการ เจริญเติบโตของหนอนแมลงวันอายุ 1, 2 และ 3 วัน โดยแยกความแตกต่างในการแสดงออกของยีนในหนอนระยะ ที่ 3 ที่อายุ 1 วัน จากหนอน อายุ 2 วัน และ 3 วันได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ อย่างไรก็ตามการแสดงออกของยีน ไม่พบความแตกต่างของหนอนแมลงวันระยะที่ 3 อายุ 2 และ 3 วัน แม้จะมีการแสดงออกที่ลดลงก็ตาม โดยสรุป แล้วการศึกษานี้พบว่าการแสดงออกของยีนไคติน ซินเทส โดยเทคนิค DHPLC สามารถหาอายุของหนอนแมลงวัน และสามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการประมาณระยะเวลาภายหลังการตายของศพทางการสืบสวนทางนิติ วิทยาศาสตร์ได้
การประมาณระยะเวลาภายหลังการตายเป็นขั้นตอนที่สำคัญของกระบวนการสืบสวนทางนิติวิทยาศาสตร์ โดยปกติจะประมาณระยะเวลาได้จากการเปลี่ยนแปลงลักษณะทางกายวิภาคศาสตร์และชีววิทยาของศพ นิติกีฏวิทยาสามารถนำมาประยุกต์ใช้เพื่อหาระยะเวลาการตายได้จากการเจริญเติบโตของหนอนแมลงวันที่พบในศพและสถานที่เกิดเหตุ แมลงวันหัวเขียว Chrysomya megacephala เป็นแมลงวันที่พบได้มากที่สุดในประเทศไทย ดังนั้นจึงใช้ในการการประมาณระยะเวลาภายหลังการตายในการสืบสวนทางนิติวิทยาศาสตร์ วิธีการหาอายุของหนอนแมลงวันสามารถทำได้โดยศึกษาทางสัณฐานวิทยา เช่น การวัดขนาดความยาวและน้ำหนักของหนอนแมลงวัน และรูปร่างของรูหายใจส่วนหน้าและส่วนท้าย ตลอดจนจำนวนรูหายใจส่วนท้ายของหนอนแมลงวัน การศึกษาดังกล่าวจำเป็นต้องอาศัยนักกีฎวิทยาที่มีความเชี่ยวชาญในการหาอายุของหนอนแมลงวันอย่างไรก็ตามวิธีนี้สามารถบ่งชี้หนอนแมลงวันในระยะที่ 1 และ 2 ได้ แต่ไม่สามารถบ่งชี้หนอนแมลงวันในระยะที่ 3 ได้ เนื่องจากระยะเวลาของหนอนค่อนข้างยาวก่อนที่จะพัฒนาเป็นดักแด้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์ในการศึกษาหนอนแมลงวันระยะที่ 3 โดยอาศัยหลักการทางอณูชีววิทยาในการประมาณระยะเวลาภายหลังการตายโดยศึกษาปริมาณการแสดงออกของยีนไคติน ซินเทสโดยเพิ่มผลิตผลของ PCR และวิเคราะห์ด้วยเทคนิค denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC) พบว่าการแสดงออกของยีนไคติน ซินเทส สัมพันธ์กับการ เจริญเติบโตของหนอนแมลงวันอายุ 1, 2 และ 3 วัน โดยแยกความแตกต่างในการแสดงออกของยีนในหนอนระยะ ที่ 3 ที่อายุ 1 วัน จากหนอน อายุ 2 วัน และ 3 วันได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ อย่างไรก็ตามการแสดงออกของยีน ไม่พบความแตกต่างของหนอนแมลงวันระยะที่ 3 อายุ 2 และ 3 วัน แม้จะมีการแสดงออกที่ลดลงก็ตาม โดยสรุป แล้วการศึกษานี้พบว่าการแสดงออกของยีนไคติน ซินเทส โดยเทคนิค DHPLC สามารถหาอายุของหนอนแมลงวัน และสามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการประมาณระยะเวลาภายหลังการตายของศพทางการสืบสวนทางนิติ วิทยาศาสตร์ได้
Description
Forensic Science (Mahidol University 2019)
Degree Name
Master of Science
Degree Level
Master's degree
Degree Department
Faculty of Medicine Siriraj Hospital
Degree Discipline
Forensic Science
Degree Grantor(s)
Mahidol University