Classification and distribution of hormone-producing cells in pars distalis of Rana Tigerina by immunocytochemical technique

Abstract

การศึกษาการจำแนกและการกระจายตัวของเซลล์ที่ผลิตฮอร์โมน GH, PRL, ACTH, TSH, LH, FSH ในต่อมใต้สมองส่วนหน้าของกบนาในช่วงฤดูผสมพันธุ์โดยวิธีอิมมูโนซัยโตเคมิสตี และอิมมูโนจุลทรรศน์อิเล็กตรอนโดยใช้ polyclonal และ monoclonal แอนติบอดี ซึ่งได้แก่ anti-bullfrog-GH,-PRL,-ACTH,-LHβ,-FSHβ และ anti-human- TSH พบว่าเซลล์ GH กระจายตัวอยู่หนาแน่นในบริเวณส่วนบน-หลังของต่อม ในขณะที่เซลล์ PRL กระจายตัวอยู่ทั่วไปทั้งต่อม ยกเว้นบริเวณส่วนปลายด้านหน้าสุดของต่อม ส่วนเซลล์ LH นั้นแบ่งเป็น 2 กลุ่มตามความเข้มของการติดสีโดยเซลล์ LH กลุ่มที่ 1 ติดสีพอประมาณ โดยรวมตัวกันอยู่บริเวณกลางและส่วนบนของต่อม แต่เซลล์ LH กลุ่มที่ 2 ซึ่งติดสีเข้ม มากกว่าจะกระจายตัวเป็นกลุ่มเล็กๆ อยู่บริเวณขอบด้านล่างของต่อม เซลล์ FSH ติดสีอ่อน กว่าเซลล์ LH โดยกระจายตัวอยู่ทั่วไปทั้งต่อม ยกเว้นบริเวณส่วนหน้าสุดและหลังสุดของต่อม เซลล์ ACTH กระจายตัวอยู่บริเวณริมด้านหน้า-ล่างสุดของต่อม ในขณะที่เซลล์ TSH กระจายตัวอยู่บริเวณริมด้านหลัง-ล่างของต่อม โดยวิธีอิมมูโนจุลทรรศน์อิเล็กตรอนพบว่าเซลล์ GH สามารถจำแนกได้โดยลักษณะ ของแกรนูลรูปร่างกลม ขนาดประมาณ 345.69±3.47 นาโนเมตร และยังมีหยดไขมัน พร้อมกับ RER ที่ขยายใหญ่ ในขณะที่เซลล์ PRL มีแกรนูลกลมขนาดใหญ่กว่าเล็กน้อย ประมาณ 500±5.9 นาโนเมตร ซึ่งคล้ายกับเซลล์ TSH ที่มีแกรนูลกลมขนาดประมาณ 436±8.4 นาโนเมตร แต่ต่างกันคือเซลล์ TSH จะมีแวคิวโอลจำนวนมากอยู่รวมกันที่ ด้านใดด้านหนึ่งของนิวเคลียส เซลล์ ACTH ประกอบด้วยแกรนูลกลมเล็กที่สุด (340 นาโนเมตร) กระจายตัวหลวมๆ แกรนูลนี้ แบ่งได้ 2 ชนิด ชนิดที่ 2 จะทึบแสงอิเล็กตรอน มากกว่าชนิดที่ 1 เซลล์ GtH สามารถแบ่งได้เป็น 3 ชนิด คือ GtH ชนิดที่ 1 จะมี แกรนูล 3 ลักษณะคือ กลม (634.6±13.6 นาโนเมตร), แท่ง (592±14 x 381±12.7 นาโนเมตร) และดัมแบล (752.3±25.7 x 278±8.5 x 191.2±12.1 นาโนเมตร) แกรนูลเหล่านี้ย้อมติดเฉพาะแอนติบอดีต่อ LH เท่านั้น ในขณะที่ GtH ชนิดที่ 2 มีลักษณะคล้ายกับ GtH ชนิดที่ 1 แต่จะมีแกรนูลบางอันที่มี ขนาดกลมและใหญ่กว่า (764±13.2 นาโนเมตร) ใน GtH ชนิดที่ 1 และแกรนูลใน GtH ชนิดที่ 2 นั้นย้อมติดทั้งแอนติบอดีต่อ LH และ FSH ส่วน GtH ชนิดที่ 3 นั้นมี เฉพาะแกรนูลลักษณะกลมและใหญ่เท่านั้น อย่างไรก็ตาม แกรนูลในเซลล์ชนิดนี้ก็ย้อม ติดทั้งแอนติบอดีต่อ LH และ FSH เช่นกัน

The classification and distributions of cells producing growth hormone (GH), prolactin (PRL), adrenocorticotropin (ACTH), thyrotropin (TSH), luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone(FSH) in pars distalis of iRana tigerina were investigated during breeding season by immunocytochemical and immunoelectronmicroscopic techniques. By immunocytochemistry, most of the immunoreactive GH cells are concentrated at the dorso-posterior region of pars distalis and some of them are distributed at the centro-ventral area. Prolactin cells are most numerous in number and are distributed throughout the gland except at the anterior-most area. There are two types of immunoreactive LH cells. Most of them are moderately immunoreactive-stained and concentrated at the centro-dorsal region; whereas a small number are intensely stained, and patches of them are distributed at the ventral rim of the gland. Immunoreactive FSH cells are distributed throughout the gland except at the anterior and posterior-most areas. Most of the immunoreactive TSH cells are concentrated at the ventral rim and centro-ventral region except at the anterior-most areas, while most of the immunoreactive ACTH cells are concentrated at the ventral-anterior region and some of them are distributed at the ventral half area. By immunogold technique, GH cells are characterized by the presence of round-shaped granules with about 345.69±3.47 nm in diameter (n= 167), dilated RER and a large number of lipid droplets, while PRL cells contain round-shaped granules about 500±5.9 nm. in size (n=203). GtH1 cells are positively reacted with only LHβ antiserum. They are large and characterized by the appearance of various shaped granules and dilated RER. Their granules are large and round (634±13.6 nm; n=40), rod (L.=592.8±14 nm, W.=381±12.7 nm; n=42), and dumbell-shaped (L.=752±25.7 nm, W.=278±8.5 nm, isthmus=191.2±12.1 1 nm; n=35). GtH2 cells are positively reacted with both LHβ and FSHbeta and similar in appearance to of GtH1 but contain some large round-shaped granules (764±13.2 nm in size; n=15), while GtH3 contain only large round shaped granules that are positively react with both LHbeta and FSHbeta. ACTH cells are identified by the presence of two types of round-shaped granules which are widely scattered and strikingly dilated RER. Type I granules are moderately electron-dense about 336.6±8.1 nm in size (n=89). whereas type II granules are electron-dense about 333.8±6.7 in size (n=98). TSH cells are characterized by round-shaped granules about 436±8.4 in size (n=50).