Expression of leptospiral recombinant protein for serodiagnosis

Abstract

กระบวนการตรวจวินิจฉัยโรคเลปโตสไปโรซีสต้องอาศัยวิธีการทางห้องปฏิบัติการ การตรวจโดยวิธี MAT เป็นวิธีมาตรฐาน แม้ว่าจะไม่สามารถตรวจได้ในห้องปฏิบัติการทั่วไป เนื่องจากต้องเพาะเลี้ยงเชื้อ โปรตีนบนผิวเซลล์ของเชื้อเลปโตสไปโรซีสมีความสามารถในการกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายได้ดี จึงเป็นแอนติเจนที่สำคัญเนื่องจากมีความสัมพันธ์กับการติดเชื้อ โปรตีน LipL32, LipL41 และ Loa22 เป็น แอนติเจนซึ่งถูกเลือกมาศึกษา และถูกโคลนเข้าสู่เวคเตอร์ pRSET-B รีคอมบิแนนท์โปรตีนที่ผลิตได้เพิ่ม จำนวนในเชื้อ E. coli และทำให้บริสุทธ์โดยใช้ Nikle affinity column รีคอมบิแนนท์โปรตีน LipL32, LipL41 และ Loa 22 มีขนาด 35, 27 และ 27 kDa ตามลำดับ รีคอมบิแนนท์โปรตีนทั้งสามชนิดถูกนำมา ทดลองเบื้องต้นโดยการทำปฏิกิริยากับซีรั่มที่มีผล MAT เป็นบวกโดยวิธี Western blot พบว่า รีคอม บิแนนท์โปรตีน LipL32 เท่านั้นที่มีปฏิกิริยา รีคอมบิแนนท์โปรตีนทั้งสามได้ถูกนำมาฉีดหนูเพื่อกระตุ้น การสร้างแอนติบอดี ซีรั่มหนูที่ได้สามารถทำปฏิกิริยากับเชื้อเลปโตสไปราบางสายพันธุ์ ซึ่งทำให้เห็นว่ารี คอมบิแนนท์โปรตีนทั้งสามชนิดมีคุณสมบัติเหมือนกับเชื้อเลปโตสไปรา รีคอมบิแนนท์โปรตีนถูกนำมา ทดสอบในการตรวจหา IgM และ IgG ด้วยวิธี ELISA เพื่อเปรียบเทียบกับวิธีการ MAT โดยใช้ซีรั่มคนไข้ที่ มีผล MAT เป็นบวก ซีรั่มที่จากคนที่สงสัยว่าเป็นเลปโตสไปโลซีสแต่ผล MAT เป็นลบ ซีรั่มคนปกติ และ ซีรั่มของคนไข้กลุ่มโรค febrile illness เช่น Scrub typhus, ไข้เลือดออก และ Melioidosis รีคอมบิแนนท์ โปรตีน LipL32 เป็นโปรตีนที่มีความจำเพาะต่อโรคเลปโตสไปโรซีศสูงที่สุด คือ 89 เปอร์เซ็นต์และ สามารถวินิจฉัยแยกโรคเลปโตสไปโรซีสจากโรค Melioidosis ในขณะที่มีเปอร์เซนต์ต่ำในกลุ่มซีรั่มคน ปกติ ส่วนกลุ่มคนที่เป็นเลปโตสไปโลซีสแต่ผล MAT เป็นลบ รีคอมบิแนนท์โปรตีน LipL32 สามารถ ตรวจพบว่าเป็นโรคได้ถึง 43 เปอร์เซ็นต์